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為什么細胞培養(yǎng)需要用二氧化碳培養(yǎng)箱?

更新時間:2022-11-28      瀏覽次數(shù):3046

為什么細胞培養(yǎng)需要用二氧化碳培養(yǎng)箱?

一般細胞培養(yǎng)液的pH在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng)(它是人體血液中最重要的pH緩沖系統(tǒng)),所以大多數(shù)培養(yǎng)液用它來保持穩(wěn)定的pH。用粉末配制培養(yǎng)液時,常常需要加入一定量的碳酸氫鈉。對大多數(shù)以碳酸鹽作為pH緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)液而言,以為了維持穩(wěn)定的pH,培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間,以保持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。同時細胞培養(yǎng)的器皿需要一定程度的透氣,以便于氣體的交換。



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是不是采用其他pH緩沖系統(tǒng)就不需要二氧化碳培養(yǎng)箱了呢?人們發(fā)現(xiàn)由于空氣中的二氧化碳濃度很低,如果細胞不在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)液中的HCO3-會被耗盡,這樣會影響細胞的正常生長。所以大部分動物細胞的培養(yǎng),還是需要二氧化碳培養(yǎng)箱。
    在過去的數(shù)十年間,細胞生物學、分子生物學、藥理學等的研究領域都有了驚人的長足進步,同時,這些領域中的技術應用也不得不跟上“腳步"。雖然典型的生命科學實驗室設備有了很大的改變,但二氧化碳培養(yǎng)箱依然是實驗室中的主要組成部分,其使用的最終目的都是維持和促使細胞和組織更好地生長。然而,隨著技術的進步,其功能和運作都變得越來越精確、可靠和方便。如今,二氧化碳培養(yǎng)箱已成為實驗室普遍使用的常規(guī)儀器之一,已廣泛應用于醫(yī)學、免疫學、遺傳學、微生物、農(nóng)業(yè)科學、藥物學的研究和生產(chǎn)。 
CO2培養(yǎng)箱是通過對周圍環(huán)境條件的控制制造出一個能使細胞/組織更好地生長的環(huán)境,條件控制的結果就會形成一個穩(wěn)定的條件:如恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、穩(wěn)定的溫度(37°C)、較高的相對濕度(95%)、穩(wěn)定的CO2水平(5%),這就是為什么上述領域的研究員如此熱衷于使用方便穩(wěn)定可靠的二氧化碳培養(yǎng)箱。 
此外,由于增加了二氧化碳濃度控制,并且使用微控制器對培養(yǎng)箱溫度進行精確控制,使生物細胞,組織等的培養(yǎng)成功率、效率都得到改善??傊趸寂囵B(yǎng)箱是普通電熱恒溫培養(yǎng)箱不可替代的新型培養(yǎng)箱。 
使用者對二氧化碳培養(yǎng)箱的選購最關心的當然就是其可靠性、污染物的控制和使用方便。CO2培養(yǎng)箱主要控制模擬活體內(nèi)環(huán)境相關的3個基本變量:穩(wěn)定的CO2水平、溫度、相對濕度。要有穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境,就要考慮這三方面的影響因素,選購時,就應該對這些“重中之重"有一定的了解才能選到適合自己的儀器。但是,其它的一些方面的“小"因素也不能忽略,因為這些都會影響儀器的使用價值和壽命。選購時,就應該從各方面的因素加以考慮。
 
溫度控制:
保持培養(yǎng)箱內(nèi)恒定的溫度是維持細胞健康生長的重要因素。當選購二氧化碳培養(yǎng)箱時,有兩種類型的加熱結構可供選擇:氣套式加熱和水套式加熱。雖然這兩種加熱系統(tǒng)都是精確和可靠的,但是它們都有著各自的優(yōu)點和缺點。水套式培養(yǎng)箱是通過一個獨立的熱水間隔間包圍內(nèi)部的箱體來維持溫度恒定的。熱水通過自然對流在箱體內(nèi)循環(huán)流動,熱量通過輻射傳遞到箱體內(nèi)部從而保持了溫度的恒定。水套式設計有其優(yōu)點:水是一種很好的絕熱物質,當遇到斷電的時候,水套式系統(tǒng)就能更可靠地長久保持培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度準確性和穩(wěn)定性(維持溫度恒定的時間是氣套式系統(tǒng)的4-5倍)。如果您的實驗環(huán)境不太穩(wěn)定(如有用電限制,或者經(jīng)常停電)并需要保持長時間穩(wěn)定的培養(yǎng)條件,此時,水套式設計的二氧化碳培養(yǎng)箱就是您好的選擇。而氣套式加熱系統(tǒng)是通過箱體內(nèi)的加熱器直接對箱內(nèi)氣體進行加熱的。氣套式設計在箱門頻繁開關引起的溫度經(jīng)常性改變的情況下能夠迅速恢復箱體內(nèi)的溫度穩(wěn)定。因此,氣套式與水套式相比,具有加熱快,溫度的恢復比水套式培養(yǎng)箱迅速的特點,特別有利于短期培養(yǎng)以及需要箱門頻繁開關的培養(yǎng)。此外,對于使用者來說氣套式設計比水套式更簡單化(水套式需要對水箱進行加水、清空和清洗,并要經(jīng)常監(jiān)控水箱運作的情況)。在購買氣套式培養(yǎng)箱時,要注意的是:為了不影響培養(yǎng),培養(yǎng)箱還應該有一個風扇以保證箱內(nèi)空氣的流通和循環(huán),此裝置還有助于箱內(nèi)溫度、CO2和相對濕度的迅速恢復。 
 
此外,有些類型的二氧化碳培養(yǎng)箱還具備外門及輔助加熱系統(tǒng),這個系統(tǒng)能加熱內(nèi)門,提供給細胞良好的濕度環(huán)境,保證細胞滲透壓維持平衡,且可有效防止形成冷凝水以保持培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度和溫度。如果您的培養(yǎng)環(huán)境需要精確的控制,那么這個輔助系統(tǒng)則是不可少的。
 
CO2控制:
CO2 濃度探測可通過兩種控制系統(tǒng)——紅外傳感器(IR)或熱傳導傳感器(TC)進行測量。當二氧化碳培養(yǎng)箱的門被打開時,CO2從箱體內(nèi)漏出,此時傳感器就會探測到CO2濃度的降低,并做出及時的反應,重新注入CO2使其恢復到原先預設的水平。熱傳導傳感器(TC)監(jiān)控CO2濃度的工作原理是通過測量兩個電熱調(diào)節(jié)器(一個調(diào)節(jié)器暴露于箱體環(huán)境內(nèi),另一個則是封閉的)之間的電阻變化來實現(xiàn)的。箱內(nèi)CO2濃度的變化會改變兩個電熱調(diào)節(jié)器間的電阻,從而促使傳感器產(chǎn)生反應以達到調(diào)節(jié)CO2水平的作用。TC控制系統(tǒng)的一個缺點就是箱內(nèi)溫度和相對濕度的改變會影響傳感器的精確度。當箱門被頻繁打開時,不僅CO2濃度,溫度和相對濕度也會發(fā)生很大的波動,因而影響了TC傳感器的精度。當需要精確的培養(yǎng)條件和頻繁開啟培養(yǎng)箱門時,此控制系統(tǒng)就顯得不太適用了。紅外傳感器(IR)作為另一個可選擇的控制系統(tǒng)比TC系統(tǒng)具備更精確的CO2控制能力,它是通過一個光學傳感器來檢測CO2水平的。IR系統(tǒng)包括一個紅外發(fā)射器和一個傳感器,當箱體內(nèi)的CO2吸收了發(fā)射器發(fā)射的部分紅外線之后,傳感器就可以檢測出紅外線的減少量,而被吸收紅外線的量正好對應于箱體內(nèi)CO2的水平,從而可以得出箱體內(nèi)CO2的濃度。因為IR系統(tǒng)不會因溫度和相對濕度的改變而受到影響,所以它比TC系統(tǒng)更精確,特別適用于需要頻繁開啟培養(yǎng)箱門的細胞培養(yǎng)。然而,此系統(tǒng)比TC系統(tǒng)更貴,這時就要結合經(jīng)費預算進行考慮了。
 
相對濕度控制:
培養(yǎng)箱內(nèi)相對濕度的控制是非常重要的,維持足夠的濕度水平才能保證不會由于過度干燥而導致培養(yǎng)失敗。大型的二氧化碳培養(yǎng)箱是用蒸汽發(fā)生器或噴霧器來控制相對濕度水平的,而大多數(shù)中、小型培養(yǎng)箱則是通過濕度控制面板(humidity pans)的蒸發(fā)作用產(chǎn)生濕氣的(其產(chǎn)生的相對濕度水平可達95-98%)。一些培養(yǎng)箱有一個能在加熱的控制面板上保持水份的濕度蓄水池(humidity reservoir),這樣可以增強蒸發(fā)作用,此蓄水池能增加相對濕度水平達97-98%。但是,這個系統(tǒng)也更復雜,由于復雜結構的增加一些難以預料的問題也會在使用過程中出現(xiàn)。
 
微處理控制系統(tǒng):
每一個使用者都希望所用的儀器能夠方便好用,微處理控制系統(tǒng)和其它各種功能附件(如高溫自動調(diào)節(jié)和警報裝置、CO2警報裝置、密碼保護設置、自動校準系統(tǒng)等等)的運用,就使得二氧化碳培養(yǎng)箱的操作和控制都非常的簡便。微處理控制系統(tǒng)是維持培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度和CO2 濃度穩(wěn)態(tài)的操作系統(tǒng)。例如PIC微處理器控制系統(tǒng),它能嚴格控制氣體的濃度并將其損耗降極低水平,以保證培養(yǎng)環(huán)境恒定不變,且能保證長期培養(yǎng)過程中箱內(nèi)溫度精確,并有LED 顯示,可設置、校正溫度和CO2濃度。不同的微處理系統(tǒng)雖然名字不相同,但是其原理與控制效果則無甚區(qū)別,選購時不必太在意它們名字上的區(qū)別,關鍵是要自己覺得使用起來方便,容易操作,而且要能夠達到所需的控制精度。
此外,我想一個報警系統(tǒng)也是不可少的吧,它能讓你及時知道培養(yǎng)箱出現(xiàn)的情況,并做出反應,從而最大限度地降低了損失,保證實驗的連續(xù)性。有些培養(yǎng)箱有聲/光報警裝置,溫度變化達±0.5℃,或CO2 濃度變化達±5時,即會自動報警;有些具有CO2濃度異常報警顯示功能。這些裝置都是為了方便使用者,以減少繁瑣枯燥的實驗過程而設計的。
 
污染物的控制:
污染是導致細胞培養(yǎng)失敗的一個主要因素,因而,二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們設計了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生,其主要途徑都是盡量減少微生物可以生長的區(qū)域和表面,并結合自動排除污染裝置來有效防止污染的產(chǎn)生。例如,鑒于CO2培養(yǎng)箱在使用過程中有時會伴有霉菌生長,為確保培養(yǎng)箱免受污染且保證儀器箱體內(nèi)的生物清潔性,有些公司開發(fā)設計了帶有紫外清潔功能的增強型CO2培養(yǎng)箱;還有公司設計的*銅外殼HEPA濾器能過濾培養(yǎng)箱內(nèi)空氣,可過濾除去99.97的0.3um以上的顆粒,并能有效殺死過濾時被擋在濾器內(nèi)的微生物顆粒;此外,自動殺菌裝置能使箱內(nèi)溫度達到90℃從而殺死污染微生物,當它與HEPA系統(tǒng)結合使用就能夠極大的減少污染。這些裝置對于細胞培養(yǎng)來說是不可少,但選擇何種清潔裝置呢?當然功能越多越好的適用,但是價格也會隨之上升。如果經(jīng)費有限,只能選擇一個價格較便宜的,這時就應該配合使用一些消毒劑和除菌劑,經(jīng)常進行消毒滅菌,也能達到貴儀器的效果,只是比較麻煩一點而已??傊?,無論選擇何種裝置,都要時刻注意保持培養(yǎng)箱的清潔,經(jīng)常清理箱體,這樣才能增加儀器的使用壽命,并使實驗順利進行,保證結果的可靠性。
 
二氧化碳培養(yǎng)箱的使用注意事項:
1. 儀器應放置在平整的地面上,環(huán)境應清潔整齊,干燥通風;
2. 儀器使用前,各控制開關均應處于非工作狀態(tài),調(diào)速旋鈕應置于最小位置;
3. 不可將流入氣體壓力調(diào)至過大,以免沖破管道及損傷探測器;
4. 關好培養(yǎng)箱的門,以免氣體外泄,影響試驗效果;
5. 每次停機前,各控制開關均應處于非工作狀態(tài)才切斷電源;
6. 操作密碼設置需至少3人知道,以免遺忘密碼而無法開啟儀器;
7. 鋼瓶氣體需純凈達標,以免損傷儀器;
8. 保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈,并定期消毒;
9. 經(jīng)常注意箱內(nèi)蒸餾水槽中蒸餾水的量,以保持箱內(nèi)相對濕度,同時避免培養(yǎng)液蒸發(fā);
10. 不適用于含有易揮發(fā)性化學溶劑,低濃度爆炸氣體和低著火點氣體的物品以及有毒物品的培養(yǎng)。
11. 正確地使用和注意儀器的保養(yǎng),使其處于良好的工作狀態(tài),可延長儀器的使用壽命;
12. 制冷系統(tǒng)停止工作后,用軟布擦凈工作腔和玻璃觀察窗;
13. 儀器在連續(xù)工作期間,每三個月應做一次定期檢查;檢查是否有水滴,污物等落入電機和外露的制冷元件上;清理壓縮機,冷凝器上的灰塵和污物;檢查保險絲,控制元件及緊固螺釘;
14. 儀器經(jīng)長期使用,自然磨損屬正常現(xiàn)象,應聯(lián)系廠家進行維修。


  • 上海簡戶儀器設備有限公司是一家高科技合資企業(yè),生產(chǎn)銷售鹽霧箱、恒溫恒濕機、冷熱沖擊機、振動試驗機、機械沖擊機、跌落試驗機的環(huán)境試驗儀器的公司,研發(fā)生產(chǎn)銷售經(jīng)營各類可靠性環(huán)境試驗設備。經(jīng)驗豐富,并得到許多國內(nèi)外廠商的信賴與支持。

  •   自公司成立以來,多次服務于國內(nèi)外大學和研究所等檢測機構,如清華大學、蘇州大學、哈爾濱工業(yè)大學、北京工業(yè)大學、法國申美檢測、中科院物理所、中科院,SGS等**單位提供實施室方案和設備及其相關服務。努力開發(fā)半導體、光電、光通訊、航天太空、生物科技、食品、化工、制藥等行業(yè)產(chǎn)品所需的測試設備裝置。公司擁有一支的研發(fā)、生產(chǎn)和售後隊伍,從產(chǎn)品的研發(fā)到售后服務,每一個環(huán)節(jié)都以客戶的觀點與需求作為思考的出發(fā)點。


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  • 簡戶擁有一支的研發(fā)、生產(chǎn)和售后服務隊伍,從產(chǎn)品的研發(fā)到售后服務,每一個環(huán)節(jié)都以客戶的觀點與需求作為思考的出發(fā)點,目前擁有博士學位2人,碩士5人,參與環(huán)境試驗箱國家標準起草和發(fā)行。企業(yè)制定標準,行業(yè)里通過ISO9001。是中國儀器儀表學會會員和理事單位。曾榮獲CCTV《中國儀器儀表20強品牌》殊榮,2010年入駐上海世博會民企館。簡戶自創(chuàng)辦以來,參與3項國家標準起草與制定,獲得40+件原創(chuàng)知識產(chǎn)權、軟著、集成電路),6次獲得上??萍夹椭行∑髽I(yè)稱號,合作過3200+家合作客戶(其中世界500強高校600家)。
      

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  • 簡戶儀器今后必將牢記為客戶提供優(yōu)質產(chǎn)品和服務的宗旨,不忘為行業(yè)貢獻前沿科學和技術的初心,再接再厲,砥礪前行!

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